一、瘦肉精快速检测方法原理

瘦肉精快速检测方法基于抗原抗体反应。该方法是使用微孔板酶标仪进行测定的。酶联板的微孔包被有针对兔抗克仑特罗特异性抗体的羊抗体。加入兔抗克仑特罗特异性抗体与第二抗体结合而被固定，洗涤后加入标准液或样品溶液与酶结合物，标准液或样品中的游离抗原与酶标抗原竞争兔抗克仑特罗特异性抗体上有限的结合位点。通过洗涤除去没有与特异性抗体结合的酶标抗原，加入酶基质和发色剂并孵育，结合到板上的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的底物。加酸终止反应后，颜色由蓝色转变为黄色。在单波长450 nm处测吸光度，吸收光强度与样品中的克仑特罗浓度成反比。

二、试剂盒的组成

每个盒中材料如下：

• 1×96孔板，包被有第二抗体；
• 6个标准液为克仑特罗水溶液。浓度分别为0 ng/kg、100 ng/kg、300 ng/kg、900 ng/kg、2700 ng/kg、8100 ng/kg；
• 1个克仑特罗过氧物酶标记物浓缩液12 ml；
• 1个克仑特罗抗体浓缩液12 ml；
• 1个酶基质/发色剂11 ml；
• 1个反应停止液，1 mol/L硫酸14 ml；
• 1个缓冲液25 ml，酶标记物及抗体浓缩液稀释用。

三、试验材料

1、设备：微孔板酶标仪、均质器、冷冻离心机、离心管、微量可调移液器、RIDAC18柱、滤纸。

2、试剂：甲醇、50 mmol/LHCL、10 mmol/LHCL、50 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液、500 mol/L磷酸二氢钾缓冲液、1 mol/LNaOH。

四、储存条件

试剂盒保存于2-8℃，不要冷冻。不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与干燥剂一起重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，避免直接暴露在光线下。

五、试剂变质的迹象

发色剂有任何颜色表明已变质，应当弃之。0标准的吸光值小于06时，表示试剂可能变质。

六、样品处理

1、尿样：尿样一般不用处理，取20清亮尿样直接测定。如果尿样混浊要过滤或离心至得到清亮尿样。

2、肝脏、肉样：粉碎的5g样品与25ml50 mmol/L HCL混合，振荡15 h，以达到均质的目的。称6g均质物，加入离心管中。10-15℃条件下4000转/min或更高的转速离心15 min。转移上清液到另一个离心管中，加300μl 1mol/L NaOH混合15 min。加入4 ml 500 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液，简单混合并在4℃保存至少15 h或过夜。10-15℃条件下4000转/min或更高的转速离心15 min。分离全部上清液，使其升至室温，然后用RIDAC18柱纯化。

RIDAC18柱纯化样品必须在室温条件下，并严格控制过柱时流速。用3 ml甲醇洗涤柱子，控制流速为1滴/s。用2ml洗涤液，洗涤柱子。肝脏、肉样的全部上清液进柱，控制流速为1滴/4s。用2 ml洗涤液，洗涤柱子，流速为1滴/s。用正压除去残留的流体并用空气或氮气吹2 min，干燥柱子。用1 ml甲醇洗脱样品，控制流速1滴/4s。在50-60℃并在弱空气或氮气流下完全蒸发甲醇溶剂。用1 ml蒸馏水溶解干燥的残留物，取20μl进行分析。

采用瘦肉精快速检测方法，可以有效保障养殖业的发展，促进生态保护和可持续发展。我们相信，未来随着技术的不断进步和普及，这一方法将在我国养殖业中发挥更加重要的作用。欢迎用实际体验验证观点。