一、材料与方法

在这次调查中，我们选取了牡丹江市的宁安、穆棱、海林、林口四个县区的23个养鸡场和29个养鸡农户作为调查对象。我们采集了每个养鸡场和养鸡农户的鸡的新鲜粪便各20份，并进行了编号和登记，随后将样品带回学校实训室进行检查。同时，我们还收集了来我校兽医院就诊的疑似球虫病的病鸡的肠内容物，并记录了养鸡地区的名称和饲养方式等信息。总共收集了52个养鸡场的粪便和肠内容物样品，共计1107份。

二、卵囊的分离与收集

我们使用饱和食盐水漂浮法对采集的病鸡肠内容物或新鲜粪便进行了球虫卵囊的收集。我们将采集的样品加水捣碎，然后用2n0目筛进行过滤和离心沉淀。接着，向沉淀物中加入饱和食盐水进行漂浮，并使用显微镜观察球虫卵囊的有无。之后，我们将收集到的卵囊离心洗去饱和盐水，并放置在装有25g／L重铬酸钾溶液的平皿中，在28℃恒温箱中培养2-3天，得到孢子化卵囊，备用。

三、卵囊扩增

我们将保存于4℃的孢子化卵囊按照4×10个/只鸡的剂量接种于10目龄严格饲养于无球虫环境的肉鸡。肉鸡饲养在无卵囊污染的条件下，所用的饲料均为特别制作，无任何添加药物。感染第5天开始收集粪便，直至第13天收集结束，检查卵囊的增殖情况和各种类的潜隐期。通过观察鸡球虫的特征、裂殖体和寄生部位、病鸡的临床症状和病变部位等来鉴定感染球虫的种类。

四、卵囊的鉴定

我们将扩增得到的卵囊在高倍镜下进行观察，包括卵囊的形态和大小、卵囊壁的厚度和颜色、内外残体和斯氏体的有无、孢子囊的形状等。在29℃恒温培养箱中，每隔2小时观察一次卵囊孢子化。每个种类随机抽样120个鸡球虫，在显微镜下观察卵囊并测量，求出最大值、最小值和平均值，根据卵囊上述生物学特征和参考资料描述进行种类鉴别。

五、结果

根据调查结果，牡丹江部分地区艾美耳球虫感染情况如下。

六、讨论

1. 牡丹江部分地区鸡球虫病的病原

本次调查发现，在牡丹江地区的海林、宁安、穆棱和林口四个县区的养鸡场中，主要查出了艾美耳球虫共计6种，其中柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫为主要感染虫种，鸡群总感染率为80.58%。这表明在牡丹江部分地区鸡球虫病的主要病原是这三种艾美耳球虫。

2. 诊断鸡球虫种类的生物学特征

通过肉眼可见的病变、病变的位置和卵囊大小等生物学特征，我们可以进行鸡球虫种类的判断。卵囊大小可以用来单纯鉴定巨型艾美耳球虫，该球虫的卵囊比其他种类球虫大。本次调查发现的6种艾美耳球虫的特征基本与文献资料报道的一致，在形态上个别虫种的卵囊稍有差异。

3. 鸡球虫病感染的季节性

卵囊的孢子化与外界环境的温度、湿度及空气流通关系密切。由于冬季鸡舍温度在20℃以下且较为干燥，所以卵囊发育受到限制，从而鸡球虫病的发生随之减少。而春秋季节，温度和湿度较大，为球虫病的高发季节。在夏季，有时气温高于30℃，卵囊发育同样受到限制，球虫病的发病率降低。本次调查时间为2010年9月至2011年3月，从感染结果来看，宁安、穆棱、海林、林口四个县区的感染率均大于75%，可见感染率较高。这个实验结果说明，本地区鸡球虫病的发生受季节影响不明显。由于牡丹江地区处于我国北方，入冬时间较早，气温较低，但是对于养殖户和集约化养鸡场大多饲养密度较大，且注意冬季的保暖，因此，球虫感染的季节性变化不显著。